Sodium Dodecylsulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

Original English text:

Sodium Dodecylsulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis

XXXX was electrophoretically resolved on 4-20% Sodium Dodecylsulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) gradient gels under reducing and non-reducing conditions and stained with Coomassie Blue (ProBlue®) (Figure 3.2.S.3.1.5.2.F01) or silver stain (Figure 3.2.S.3.1.5.2.F02) by using Method 7423. SDS-PAGE of non-reduced XXXX shows a main band at approximately 100kiloDaltons (kDa) that represents the intact monomer (a homodimeric structure). The reduced form of XXXX shows a main band at approximately 53 kDa which represents the single chain form. Additionally, non-reduced XXXX on Coomassie Blue and Silver stained gels displays faint bands at approximately 53, 60, and 200 kDa.
Western Blot analysis was performed to determine whether these bands were product-related. XXXX resolved by SDS-PAGE was transferred to a PVDF membrane, blocked and probed with mouse monoclonal anti-CTLA4 antibody (11D4) and goat anti-mouse IgG horseradish peroxidase conjugate. Staining with the anti-CTLA4 antibody identified the major band of approximately 53 kDa that was observed under reducing conditions as XXXX. The major band of non-reduced XXXX (approximately 100 kDa) was identified, as well as the minor bands at approximately 200, 60, and 53 kDa (Figure 3.2.S.3.1.5.2.F03 and Figure 3.2.S.3.1.5.2.F04). This analysis demonstrates that these faint bands correspond to product-related species.

Перевод/Translation into Russian:

Полиакриламидный гель-электрофорез с додецилсульфатом натрия

XXXX разделили электрофоретически методом электрофореза в градиентных 4-20% полиакриламидных гелях с додецилсульфатом натрия (ДСН-ПААГ) в восстанавливающих и невосстанавливающих условиях и окрасили кумасси голубым (ProBlue®) (рис. 3.2.S.3.1.5.2.F01) или серебром (рис. 3.2.S.3.1.5.2.F02) по методу 7423.  ДСН-ПААГ невосстановленного XXXX показал наличие основной полосы на уровне примерно 100 килоДальтон (кДа), которая соответствует интактному мономеру (гомодимерной структуре). Восстановленная форма XXXX дает основную полосу около 53 кДа, которая соответствует одноцепочечной форме. Кроме того, невосстановленный XXXX в гелях, окрашенных кумасси синим и серебром, дает слабо выраженные полосы на уровне примерно 53, 60 и 200 кДа.
Для того, чтобы определить принадлежность этих полос к продукту, провели исследование методом Вестерн-блоттинга.  После разделения в ДСН-ПААГ XXXX перенесли на мембрану ПВДФ, провели блокировку и детекцию с использованием моноклональных антител мыши против CTLA4 (11D4) и конъюгата антител козла против IgG мыши с пероксидазой хрена.  Окрашивание с помощью антител против CTLA4 выявило основную полосу на уровне примерно 53 кДа, которая наблюдалась в восстанавливающих условиях как XXXX.  Была идентифицирована основная полоса невосстановленного XXXX (примерно 100 кДа), а также минорные полосы примерно 200, 60 и 53 кДа (рис. 3.2.S.3.1.5.2.F03 и рис. 3.2.S.3.1.5.2.F04).  Это исследование демонстрирует, что данные слабо выраженные полосы соответствуют разновидностям продукта.