Biochemical, Biophysical and Functional Characterization

Оригинал/Original English text:
Biochemical, Biophysical and Functional Characterization

XXXX is a highly glycosylated fusion protein comprised of the extracellular domain of human Cytotoxic T-Lymphocyte Antigen-4 (CTLA4) and part of a human immunoglobulin G constant region (Cγ1), containing the hinge, CH2 and CH3 domains. It exists as a covalent homodimer (referred to as XXXX "monomer") linked through an inter-chain disulfide bond and has a molecular weight of approximately 92,300 Daltons. Carbohydrates (N- and O-linked oligosaccharides) contribute approximately 15% of the molecular weight, based on theoretical mass of the amino acids and observed mass. Purified XXXX drug substance lots are >98% pure (monomer). XXXX binds to B7-1 and B7-2 (CD80/CD86) and inhibits T-cell activation by blocking a major co-stimulatory pathway.
Primary, secondary structure, post-translational modification and product variants were characterized using orthogonal biophysical and biochemistry approaches. Functional characterization assessed direct binding using Surface Plasmon Resonance and effects on co-stimulation using a B-Cell: T-Cell based assay to measure inhibition of the IL-2 response. 

Перевод/Translation inti Russian:
Биохимические, биофизические и функциональные характеристики

XXXX – сильно гликозилированный химерный белок, который состоит из внеклеточного домена антигена цитотоксических T-лимфоцитов-4 (CTLA-4) и фрагмента консервативной области иммуноглобулина G человека (Cγ1), содержащего шарнирный домен и домены CH2 и CH3. Он существует в виде ковалентно соединенного гомодимера (называемого «мономером» XXXX), связанного межцепочечной дисульфидной связью и имеющего молекулярную массу примерно 92 300 Да. Углеводы (N- и O-связанные олигосахариды) составляют около 15% от молекулярной массы, согласно расчетам на основании теоретической массы аминокислот и наблюдаемой массы. Партии очищенной лекарственной субстанции XXXX имеют степень очистки >98% (мономер). XXXX связывается с B7-1 и B7-2 (CD80/CD86) и ингибирует активацию T-клеток, блокируя основные ко-стимулирующие пути.

Первичная, вторичная структура, варианты пост-трансляционных модификаций и продукта охарактеризованы с помощью независимых биофизических и биохимических подходов. С помощью определения функциональных параметров оценивали прямое связывание с применением поверхностного плазмонного резонанса и влияния на ко-стимуляцию с применением клеточного анализа н основе B-клеток и T-клеток для измерения ингибирования ответа на IL-2.